重组腺病毒Ad—CD／TK对人肝癌细胞的作用

目的：通过构建含CD／TK双自杀基因的重组腺病毒，探讨治疗肝细胞癌的途径。方法：目的基因CD／TK，自真核载体pCEA—CD／TK中切出，亚克隆至腺病毒穿梭质粒中。构建成转移质粒pAdtrack—CMV—CD／TK，经Pme I酶切后与pAdeasy-1质粒混匀共转化细菌BJ5183，挑选克隆pAd—CD／TK，经Pac I酶切后转染293细胞，PCR鉴定后，在人肝癌细胞中测定其感染效率并观察其体外对人肝癌细胞的作用。结果：pAdtrack-CMV—CD／TK和pAd—CD／TK经酶切鉴定正确，pAd—CD/TK转染293细胞，制备腺病毒后，发现其对人肝癌细胞有较高的感染效率。给予氟胞嘧啶后，发现被感染细胞能够被杀死，并具有很高的旁观者效应。结论：构建的含CD／TK双自杀基因的重组腺病毒对人肝癌细胞有较高的感染效率，在体外观察到对人肝癌细胞有较好的杀灭作用。