番茄斑萎病毒运动蛋白NSm的原核表达及抗体制备

将番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）运动蛋白NSm基因克隆到原核表达载体pET-32a （＋） 中,利用大肠杆菌系统表达NSm蛋白,以Ni2＋-NTA agarose亲和柱纯化该蛋白与His组氨酸的融合蛋白,免疫家兔制备融合蛋白多克隆抗体。Western blot检测显示,该抗体与NSm重组蛋白以及普通烟病叶中的NSm蛋白具有特异性反应。采用该抗体对TSWV感染的普通烟叶片低温超薄切片进行免疫胶体金标记,透射电镜观察发现特异性金颗粒主要定位在病叶细胞的胞间连丝中,而健康烟草叶片组织中没有金颗粒特异性标记。结果表明,该抗体可用于研究NSm在细胞中的定位。