绿色木霉几丁质酶基因Tvchi cDNA的克隆、原核表达与活性分析

利用RT—PCR方法从绿木霉ZBS-6中扩增了几丁质酶基因Tvchi，序列分析表明Tvchi开放阅读框为1293bp，编码430个氨基酸残基，Blast分析表明，与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性。将该基因克隆到原核表达载体pET-28a上，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，SDS—PAGE和Westem印迹分析表明成功的获得了47kD的融合蛋白。该融合蛋白经Ni—NTA柱亲和纯化，获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi。Tvchi最适酶活温度为37℃，最适酶活pH值为6．8。表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础。