CRISPR/Cas9介导的KIFC1基因敲除对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

CRISPR/Cas9介导的KIFC1基因敲除对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

R737.33; 目的 探讨KIFC1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法 设计靶向KIFC1基因的sgRNAs并基于pSpCas9(BB)-2A-GFP载体构建重组质粒,共转染至HeLa细胞.通过流式细胞分选、有限稀释和测序验证筛选单克隆敲除细胞株.采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测敲除细胞的KIFC1转录及蛋白表达水平,利用相差显微成像、荧光共聚焦显微成像观察细胞核、微管骨架等细胞表型.通过生长曲线绘制、EdU标记、吖啶橙染色分析细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡情况.结论 KIFC1基因缺失影响HeLa细胞微管骨架的组装并形成异常延伸和细胞分...

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Veröffentlicht in:肿瘤防治研究 2023, Vol.50 (11), p.1051-1058
Hauptverfasser: 范晓静, 魏雅岚, 叶洲杰, 朱丽萍, 王心睿
Format: Artikel
Sprache:chi
Online-Zugang:Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:R737.33; 目的 探讨KIFC1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法 设计靶向KIFC1基因的sgRNAs并基于pSpCas9(BB)-2A-GFP载体构建重组质粒,共转染至HeLa细胞.通过流式细胞分选、有限稀释和测序验证筛选单克隆敲除细胞株.采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测敲除细胞的KIFC1转录及蛋白表达水平,利用相差显微成像、荧光共聚焦显微成像观察细胞核、微管骨架等细胞表型.通过生长曲线绘制、EdU标记、吖啶橙染色分析细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡情况.结论 KIFC1基因缺失影响HeLa细胞微管骨架的组装并形成异常延伸和细胞分裂,进而导致细胞核形态异常、染色质丢失、细胞周期停滞、凋亡增加.
ISSN:1000-8578
DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2023.23.0611