TFPI-2基因克隆及其在胰腺癌细胞中的表达

目的克隆人TFPI-2基因全长cDNA，构建其真核表达载体，并将其转染到人胰腺癌细胞Panc-1中，检测其表达。方法用RT-PCR法从人胎盘组织中扩增人TFPI-2基因，并将其与真核表达载体pEGFP-C1连接，构建真核表达载体pEGFP-C1-TFPI-2。将构建的重组载体转染到人胰腺癌细胞系Panc-1细胞，Westernblot检测TFPI-2在Pane-1细胞中的表达。结果RT-PCR成功的扩增出一条约708bp的片断，扩增片断与载体连接后，经限制性内切酶酶切电泳分析和DNA序列测定证实该基因已经成功构建到载体上，转染Panc-1细胞后，荧光显微镜观察到稳定转染细胞发出较强绿色荧光，Westernblot技术证明TFPI-2基因能在Panc-1细胞中稳定表达。结论成功构建了人TFPI-2基因的真核表达载体pEGFP-C1-TFPI-2，获得了稳定表达TFPI-2的Panc-1细胞，证实TFPI-2基因能够在人胰腺癌细胞系Panc-1中高效、稳定的表达，为进一步研究其胰腺癌迁移、浸润及转移中的作用打下基础。