利用抑制性消减杂交技术筛选大鼠哮喘相关基因

目的：利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因。方法：采用抑制性消减杂交技术，以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子，对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子，将消减杂交获得的DNA片断与pGEM—TEasyVector连接，构建cDNA文库后，转化大肠杆菌DH5a，筛选阳性克隆。将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析，测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对，获得差异性表达基因的信息。结果：扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆，随即挑选36个测序，除去重复序列，结果中含有已知的基因4个，ESTs2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个。结论：成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库，筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因。