幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统的构建及其重组蛋白免疫性的鉴定

目的：克隆幽门螺杆菌（Hp）ureB基因并构建其原核表达系统。方法：采用高保真PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株Y06中扩增ureB基因，T-A克隆后测定核苷酸序列，构建pET32a的ureB表达载体，在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达，采用Hp全菌抗体的Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性。结果：所克隆的ureB基因与报道的相应核苷酸序列同源性为96.88％-97.82％，氨基酸序列同源性高达99.65％-99.82％。pET32a-ureB-BL21DE3系统的UreB融合蛋白表达量高达细菌总蛋白的40％左右。UreB融合蛋白能与Hp全菌抗体发生结合反应，免疫家兔能获得高效价抗体。结论：本研究成功地构建了Hp ureB高效表达系统，所表达的UreB融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性，可作为Hp瘤苗的抗原。