融合6个组氨酸的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在家蚕幼虫中的表达

将融合6个组氨酸（6×his）序列的hGM—CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis—GM—CSF，pBacPAKHis—GM—CSFDNA与线性化病毒Bm—BacPAK6DNA共转染BmN细胞，获得了表达rhGM—CSF融合蛋白的重组病毒vBacPAKHis—GM—CSF．用重组病毒感染家蚕五龄起蚕，分别在24、48、72、96，120h和144h剪腹足取蚕血淋巴，ELISA法测得rhGM—CSF融合蛋白在120h的蚕血淋巴中表达量最高，约为15μg／mL蚕血淋巴．融合蛋白通过Poly—His Protein Purification Kit纯化．SDS-PAGE和Western blotting分析表明，表达产物是3种糖基化程度不同的，分子量分别约为18、20、31kD的蛋白质．