病毒性心肌炎患者血浆外泌体生物标志物蛋白质组学筛选

目的 分析健康对照组(Control组)与病毒性心肌炎组(VMC组)血浆外泌体中的差异蛋白质组,筛选可能与VMC早期诊断密切相关的蛋白标志物.方法 分别收集河南省人民医院(2016年1月至2017年12月)Control组健康人及VMC组患者血浆标本各50份,按照随机数字表法选取Control组(n=5)与VMC组(n=5)空腹血浆标本各1 ml,分别利用超速离心法提取血浆外泌体后,采用差异凝胶双向电泳(DIGE)技术进行蛋白质分离,经差异分析软件处理后,采集VMC组和Control组之间差异＞2倍的蛋白质点,通过应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间/飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)对差异蛋白点进行鉴定.各组随机采取40份血浆外泌体标本,采用VMC特异性差异蛋白进行酶联免疫吸附实验(ELISA)验证.结果 VMC组与Control组血浆外泌体蛋白组相比较,共筛选出10个差异蛋白点,包括8个上调蛋白点,2个下调蛋白点.经质谱鉴定后,表达上调的蛋白包括角蛋白2(KRT2)、角蛋白5(KRT5)、角蛋白9(KRT9)、角蛋白77(KRT77)、角蛋白78(KRT78)、锌-α2糖蛋白(AZGP1)、触珠蛋白(HP)和视黄醇结合蛋白4(RBP4);表达下调的蛋白是CD5抗原样蛋白(CD5L)和补体C1q亚基B(C1QB).选取RBP4进行ELISA验证,结果表明,与Control组[(64.5±2.6)μg/L]相比较,VMC组[(148.7±3.9) μg/L]血浆外泌体中RBP4特异性表达上调(P＜0.05),与DIGE结果一致.结论 成功筛选到10个VMC相关差异蛋白质,RBP4有可能成为VMC早期筛查及诊断的特异性生物标志物.