羊种布氏杆菌基因外重复回文序列经Toll样受体9诱导IFN-α表达的研究

目的 筛选具有活化Toll样受体9（TLR9）活性的羊种布氏杆菌DNA中基因外重复回文序列（REPs）,检测其经TLR9诱导的干扰素-α（IFN-α）表达,为羊种布氏杆菌病的防治提供新思路.方法 针对羊种布氏杆菌Brucella melitensis NI基因组序列,利用生物信息学技术识别其REPs后,合成序列.将合成的天然骨架脱氧寡核苷酸（ODNs）转染小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测IFN-α的分泌水平.采用TLR9-siRNA沉默RAW264.7中的TLR9,将上述诱导IFN-α分泌增加的阳性ODN序列转染RAW264.7,ELISA方法检测IFN-α的分泌变化.结果 筛选获得2 200个羊种布氏杆菌基因组REPs,选择二级茎环结构较好的12条ODNs序列进行合成,ELISA结果显示,ODNs M2、M3、M4、M5、M6、M7、M9、M12介导IFN-α分泌量分别为（26.944±1.868）、（46.461±2.562）、（34.980±2.055）、（43.016±2.162）、（62.533±4.031）、（67.125±5.069）、（18.908±1.633）、（39.572±2.465）pg/ml,显著高于阴性对照组的（12.594±1.338）pg/ml,差异有统计学意义（t=10.817、20.295、15.812、20.724、20.365、18.016、5.180、16.660,均P＜0.05）,且阳性ODN M6所介导的IFN-α分泌可以被TLR9-siRNA显著抑制.结论 羊种布氏杆菌基因组REPs可经TLR9信号通路引起炎性因子IFN-α分泌增加,参与介导羊种布氏杆菌早期感染后的固有免疫应答.