CGRP修饰MSCs对大鼠颈动脉球囊损伤后血管狭窄的影响

目的 探讨降钙素基因相关肽（CGRP）修饰的间充质干细胞（MSCs）对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和血管狭窄的影响.方法 培养应用MSCs与VSMCs,Lv-CGRP-EGFP转染MSCs,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测MSCs中CGRP的表达.MSCs与VSMCs共培养后,实验分为MSCs^CGRP＋/＋＋ VSMCs组、MSCs^CGRP-/-＋ VSMCs和MSCs^PBS＋VSMCs组,应用3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）法检测VSMCs增殖能力.构建大鼠颈动脉球囊损伤模型,携带慢病毒的MSCs移植动物模型中,细胞移植后7d,Western印迹法检测血管中CGRP表达,免疫荧光染色检测损伤血管CD31的表达;细胞移植后28 d,苏木精-伊红染色法（H-E染色）检测损伤血管新生内膜/中膜面积;免疫组化法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达.结果 病毒转染后48 h,与PBS组比较,CGRP修饰的MSCs中CGRP的mRNA（0.135±0.049比25.306±0.110）和蛋白水平（1.953±0.039比19.483±0.421）均增高（均P＜0.05）.细胞共培养后24、48、72、96 h,MTT染色显示,与MSCs^PBS＋ VSMCs组比较,MSCs^CGRP＋/＋＋ VSMCs组中VSMCs的增殖活性明显减弱[24 h（0.54±0.06比0.44±0.06）,48 h（0.69 ±0.11比0.54±0.07）,72 h（0.87±0.08比0.70 ±0.11）,96 h（1.42±0.28比1.10±0.24）均P＜0.05].体内研究显示：细胞移植后7d,与对照组比较,MSCs-CGRP移植组中CGRP表达水平明显增加（23.953±3.039比50.451±5.311）（均P＜0.05）,免疫荧光染色检测显示MSCs-CGRP组内膜有CD31连续性表达,而对照组没有.细胞移植后28 d,HE染色显示,与对照组（0.99±0.06）比较,MSCs-CGRP组（0.48±0.03）血管增生内膜面积明显减小（均P＜0.05）,免疫组化结果显示,MSCs-CGRP组中血管内膜的PCNA表达量较对照组明显降低（78.4％±10.2％比25.1％±6.0％,P＜0.05）.结论 转染CGRP的MSCs能分泌CG