干预GPC-3基因转录对高转移潜能肝癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨特异性磷脂酰肌醇蛋白多糖3（GPC-3）小发夹RNA（shRNA）转染对高转移潜能肝癌细胞增殖和肝癌生长的抑制作用。方法将构建与筛选GPC．3shRNA最有效序列转染MHCC-97H细胞，以荧光定量聚合酶链反应（PCR）或Western印迹分析mRNA或蛋白表达；以5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）、划痕和Transwell试验评估肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力；以Caspase-Glo@3／7荧光法分析细胞凋亡；以裸鼠移植瘤观察对肝癌形成与生长的影响，免疫组化分析瘤组织GPC-3、13-环连蛋白（catenin）、p-GSK3β及细胞周期蛋白（cyclin）D1表达。结果shRNA，质粒转染MHCC-97H细胞效率〉80％，GPC-3mRNA下降75．6％（t=15．473，P〈0．001），蛋白表达受抑；细胞增殖抑制71．1％（t=10．468，P〈0．001）、迁移抑制80．1％（t=32．697，P〈0．001）与侵袭抑制69．1％（t=39．647，P〈0．001）；β-cateninmRNA抑制67．7％（t=18．4，P〈0．001）；GlilmRNA上调53．3％（t=-4．824，P=0．008）；干预组裸鼠肿瘤形成平均11．2d，显著长于阴性组5．5d和空白组5．3d（P〈0．001），瘤体积65．5mm3明显小于空白组404．8mm3和阴性组365．7mm3（P〈0．001）；且瘤组织GPC-3、B-catenin、P-GSK313及cyclinDl等信号分子表达显著下调（P〈0．01）。结论干预GPC-3转录抑制肝癌细胞增殖、迁移和肿瘤生长，提示GPC-3为潜在的肝癌治疗分子靶目标。