铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统毒力相关蛋白的差异表达

目的分析铜绿假单胞菌在耐药性变化时菌株Ⅲ型分泌系统（T3SS）毒力相关蛋白的表达差异，结合患者的临床资料，探讨耐药性变化与细菌毒力变化的相关性。方法筛选源于同一患者呼吸道、多次分离、药敏谱发生动态改变的铜绿假单胞菌，用肠杆菌基因间重复一致序列PCR（ERIC．PCR）方法确定菌株的同源性，以同一克隆的菌株体系为研究对象，Kirby—Bauer纸片法检测菌株对药物的敏感性，PCR方法检测T3SS系统和菌株的毒力基因型，双向蛋白电泳比较菌株的全菌蛋白表达谱，质谱分析差异蛋白点，并在蛋白质数据库进行检索。收集患者临床信息，了解临床特征、细菌耐药性、毒力相关蛋白三者问的关系。结果筛选出1例慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）合并肺炎的患者符合入选条件，其1年内3次呼吸道分离出铜绿假单胞菌，药敏谱依次为：敏感一多重耐药（MDR）-泛耐药（PDR）。3株菌株毒力基因属exoU＋／exoS-型，经ERIC-PCR证实为同一克隆。双向凝胶电泳显示3株菌有21个差异表达蛋白。质谱分析发现其中11个蛋白功能明确（9个与细菌基础代谢有关）。仅毒力相关蛋白二硫化物氧化还原酶A（DsbA）在PDR株时表达明显上调，在敏感株表达最低。临床信息显示该患者在分离出PDR时，肺部感染最重，并于1个月后死亡。结论在长期定植、感染过程中，生存环境的变化可能导致铜绿假单胞菌的耐药表型发生变化，同时菌株毒力加强，共同导致感染难于控制。DsbA在铜绿假单胞菌毒力变化中可能发挥了重要的作用。