异基因CD8^＋T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制

目的研究异基因CD8^＋T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法磁珠分选正常人外周血CD8^＋T淋巴细胞，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（FITC）试剂盒检测异基因CD8^＋T淋巴细胞作用后人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和人皮肤微血管内皮细胞（HDMEC）凋亡率，RT—PCR检测蛋白酶激活受体1（PAR-1）mRNA表达，Western印迹检测内皮细胞PAR-1、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3表达。结果HUVEC与HDMEC在基因和蛋白水平均有PAR-1表达。异基因CD8^＋T淋巴细胞作用24h和48h，HUVEC凋亡率分别为51．7％±4．1％和29．4％±3．3％，HDMEC凋亡率分别为28．9％±2．2％和15．2％±1．8％，均显著高于对照组（均P〈0．01）；SFLLRN（PAR-1激动剂）诱导两种内皮细胞凋亡的作用与异基因CD8^＋T淋巴细胞的差异无统计学意义（P〉0．05）。异基因CD8^＋T淋巴细胞作用后，HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达均高于对照组（均P〈0．05），30min时分别为对照组的9．8、6．3倍，Caspase-3裂解增加，峰值分别为对照组的5．1、4．3倍；SFLLRN作用后，HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达亦均高于对照组（均P〈0．05），30min时分别为对照组的9．8、6．3倍，Caspase-3裂解增加，峰值分别为对照组的5．7、2．9倍。JNK磷酸化无明显变化。PAR-1抗体和p38MAPK抑制剂（SB203580）可显著降低异基因CD8^＋T淋巴细胞诱导的内皮细胞凋亡（P〈0．01）。结论异基因CD8^＋T淋巴细胞通过PAR-1途径引起细胞内p38MAPK激活、Caspase-3裂解，从而诱导血管内皮细胞凋亡。