抗凝血酶基因T98I和A404T突变导致抗凝血酶缺陷症的分子机制研究

目的研究抗凝血酶（AT）基因T98I和A404T突变致AT缺陷症的分子机制。方法构建AT野生型和突变体表达质粒（ATwt、ATT98I、ATA404T）并瞬时转染至COS-7细胞或CHO细胞，进行体外表达试验、脉冲-追踪试验和细胞免疫荧光染色；用荧光实时PCR（RT—PCR）检测转染细胞ATmRNA表达量的改变；蛋白降解抑制实验检测突变蛋白在细胞内的降解途径。结果ATT98I未从转染细胞内分泌且在细胞内逐渐降解，ATA404T仅部分从细胞内分泌、大部分未分泌并在细胞内逐渐降解。RT—PCR显示，与野生型ATmRNA相比，突变体ATmRNA不降低。脉冲-追踪试验发现，这两种AT突变体分泌障碍，未在细胞内聚集而是降解。蛋白降解抑制实验显示，突变体ATT98I通过蛋白体酶途径进行细胞内降解。转染细胞荧光染色显示，转染ATT98I质粒的CHO细胞内荧光强度明显减弱、无明显核周聚集，而转染ATA404T质粒的CHO细胞内荧光减弱且弥散分布于胞质、核周有轻度聚集。结论分泌障碍和细胞内降解是AT基因T98I和A404T突变导致AT缺陷症的分子病理机制。