myocardin在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用

目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及myocardin在其转分化过程中的作用。方法经免疫磁珠法（用血小板内皮细胞黏附分子1做免疫分选标记）纯化分离的原代肺动脉内皮细胞，用RNA干扰（RNAi）技术构建psimyocardin RNA表达载体抑制myocardin基因的表达。细胞分为常氧组（含21％O2，5％CO2和74％N2）、低氧组（含1％O2，5％CO2，94％N2）、常氧＋myocardin抑制组和低氧＋myocardin抑制组，分别培养1d．4d和7d。用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测myocardin mRNA的表达；免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌（α-SM）肌动蛋白的表达，结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化。结果（1）免疫荧光检测PAEC中α-SM-肌动蛋白阳性率在低氧4d组（0．96‰±0．08‰）明显低于7d组（2．07‰±0．06‰，P〈0．01），阳性细胞呈梭形或多角形，而常氧组和低氧1d组均未见α-SM-肌动蛋白的阳性表达；（2）RT-PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧4d组（0．14±0．01）明显低于低氧7d组（0．23±0．03，P〈0．01），常氧组和低氧1d组均未检测出其表达。（3）RNAi沉默myocardin基因表达后，其mRNA水平明显低于对应的低氧4d组（0．03±0．02）和低氧7d组（0．05±0．01，P〈0．01）；平滑肌样细胞的转分化率也明显降低（0．19‰±0．07‰，0．21‰±0．04‰，P〈0．01）。以上每组重复3次。结论PAEC中存在少数细胞具有转分化为平滑肌样细胞的潜能，低氧可明显促进其转分化，myocardin在此转分化过程中起重要作用。