pshRNA-DNMT1介导的胃癌AGS细胞凋亡的体内外研究

目的构建沉默DNMT1基因的重组体pshRNA-DNMT1,研究其体内外对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法设计短发夹RNA（shRNA）的寡核苷酸片断,克隆到载体pTZU6＋1中,构建重组体pshRNA-DNMT1,转染胃癌细胞株AGS,用Western 印迹检测DNMT1蛋白质水平变化,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法评估mRNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）动态监测活细胞数,电镜和原位末端标记技术（TUNEL）观察其体外的促凋亡作用.构建裸鼠胃癌模型,经pshRNA-DNMT1处理后观察瘤体大小,绘制生长曲线;用苏木素伊红（HE）染色法、电镜和TUNEL检测细胞凋亡,用增殖细胞核抗原（PCNA）法评价细胞的增殖能力.结果成功构建重组质粒pshRNA-DNMT1后,进行序列分析得到确证.pshRNA-DNMT1转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白质表达量减少,抑制率为28.24%,48 h为68.54%,72 h为81.47%,重组质粒pshRNA-DNMT1对胃癌AGS细胞中DNMT1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24 h抑制率为21.63%,48 h为52.97%,72 h为72.06%.转染后24、48和72 h细胞数存活率为PBS组的79.49%、51.63%和39.16%.pshRNA-DNMT1能抑制肿瘤生长,呈一定的时间和剂量依赖性.结论重组质粒pshRNA-DNMT1能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内DNMT1基因的表达.在胃癌细胞株AGS的体内外实验中均能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.