衰减子基因突变导致临床大肠埃希菌高产头孢菌素酶的研究

目的研究临床分离的一株大肠埃希菌中衰减子基因突变对头孢菌素酶（AmpC）基因表达以及耐药表型的影响。方法用三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等对临床分离的一株大肠埃希菌进行表型检测。采用聚合酶链反应（PCR）、基因测序以及比对等方法对调节基因进行扩增、分析，并把调节基因克隆到pCAT3-basic（无启动子的报告基因载体）上，用酶联免疫法（直接法）和最小抑菌浓度测定（间接法）等方法对基因表达进行研究。结果与标准菌株大肠埃希菌K-12AmpC基因相比，受试菌的衰减子区出现了4个碱基22C—T，26、27TA—GT，32G—A的替换。该株菌三维试验阳性，等电聚焦以及酶抑制试验表明该菌株能产3种等电点（PI），分别为5．4、8．2及9．0的B一内酰胺酶，等电点为9．0的β-内酰胺酶能够被氯唑西林抑制而不能被克拉维酸抑制。微量稀释法检测表明，该菌株不但对多种三代头孢菌素耐药，而且对头孢吡肟耐药，但对碳青霉烯类抗生素仍敏感。把它的AmpC调节基因成功地克隆到报告基因载体pCAT3-basic中，直接和间接检测表明突变的调节基因表达CAT蛋白的水平比敏感菌株调节基因高约10倍。结论大肠埃希菌衰减子突变能够导致AmpC基因高表达而对多种β-内酰胺类抗生素表现耐药。