WT1基因肽诱导细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗白血病的实验研究

R3; 目的探讨肾母细胞瘤基因(WT1)肽负载树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病细胞体外靶向免疫治疗作用.方法合成一段针訦LA-A*0201锚位的WT1特异性九聚肽(CMTWNQMNL),体外负载来源于HLA-A*0201阳性健康志愿者的DC后,诱导产生WT1肽特异性、HLA-A*0201限制的CTL(A组),四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法观察其对白血病细胞株及原代白血病细胞体外杀伤效应.采用流式细胞术直接免疫荧光标记法,检测DC表面抗原CD83、CD1α、CD80、CD86、CD14、HLA-DR和T细胞表面的CD3、CD4、CD8、CD56等的表达.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照组.结果 K562细胞不表达HLA-A*0201但高表达WT1基因(1.111±0.128);U937细胞表达HLA-A*0201,但极低表达WT1基因(0.006±0.001);NB4细胞表达HLA-A*0201,且高表达WT1基因,NB4/WT1D、NB4/WT1A及NB4细胞株中WT1表达水平分别为1.42±0.07、3.20±0.19和1.14±0.09,均显著高于U937细胞株(P均＜0.01).A组CTL能够通过HLA-A*0201限制方式杀伤HLA-A*0201阳性,WT1+ 抖NB4白血病细胞株和白血病患者原代骨髓单个核细胞,而不能特异性杀伤HLA-A*0201阳性,WT1- U937细胞胞株及白血病细胞,HLA-A*0201-,WT1+ K562细胞株及白血病细胞,对HLA-A*0201阳性或阴性正常骨髓细胞也无杀伤活性;A组CTL对NB4/WT1D、NB4/WT1A和NB4细胞株杀伤活性无统计学意义(P=0.065, P=0.621).结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-Ⅰ类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病细胞,而对正常骨髓细胞无杀伤作用,WT1基因的表达产物可以作为白血病免疫治疗靶点.