构建靶向杀伤白血病细胞的新型重组白细胞介素6D24-PE40KDEL融合蛋白

R73; 目的构建能高度特异地靶向杀伤高表达白细胞介素6受体(IL-6R)白血病细胞的新型重组IL6-PE40KDEL(绿脓杆菌外毒素)融合蛋白.方法通过定点诱变将绿脓杆菌外毒素PE40基因羧基端最后5个氨基酸REDLK替换成内质网蛋白滞留序列(KDEL),采用重叠延伸的基因融合技术将N-末端缺失24个氨基酸的人IL6(IL6D24)cDNA与PE40KDEL基因进行重组融合构建,利用HB101/pBV220表达系统实现该新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,经MonoQ柱层析纯化后,以四甲基偶氮唑类似物(MTS)法检测IL6D24-PE40KDEL的靶向杀伤活性.结果构建的新型重组IL6D24-PE40KDEL融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到40%左右;经包涵体分离、复性、变性及纯化所得该融合蛋白纯度＞95%;纯化的融合蛋白能与IL6抗体及绿脓杆菌外毒素A(PEA)抗体发生特异性结合;IL6D24-PE40KDEL融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL6R的U937细胞,IC50约为250 ng/ml,而对不表达IL6R的人T淋巴白血病细胞系则无杀伤作用.结论成功构建了具有靶向杀伤高表达IL6R白血病细胞的新型重组IL6D24-PE40KDEL融合蛋白,为深入地探索利用IL6/IL6R系统介导靶向治疗高表达IL6R白血病奠定了坚实的基础.