胃癌单克隆抗体MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv的制备

R73; 目的 获得胃癌单克隆抗体(简称单抗)MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv(抗-IdScFv)，为研制MG7的抗-IdScFv重组胃癌瘤苗奠定基础。方法 以MG7单抗与匙孔血蓝蛋白(KLH)的交联物免疫Balb/c小鼠，取脾分离mRNA。以逆转录聚合酶链反应技术分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VL），经linkerDNA连接形成ScFv基因片段。将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1。在辅助噬菌体M13KO7的作用下，获得重组噬菌体抗体ScFv。以单抗MG7对重组噬菌体抗体ScFv进行四轮筛选后，随机挑取克隆，经噬菌体ELISA筛选抗-IdScFv单克隆，并对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。经富集后，在随机筛检的60个克隆中得到24个噬菌体呈现型抗-IdScFv单克隆，阳性率为40%。在24个克隆中，有5个为β或γ型抗-IdScFv。结论 用噬菌体抗体技术能够成功地获得单抗MG7的抗-IdScFv，为开展用抗-IdScFv防治胃癌的研究创造了条件。