人源IL-21增强细胞因子诱导杀伤细胞抗白血病作用及其机制研究

目的研究IL-21对外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）抗白血病作用及其机制。方法采集分离正常人外周血单个核细胞，加用细胞因子诱导培养，用MTT法检测CIK细胞的增殖能力及其对白血病细胞系K562细胞的杀伤作用；用流式细胞术检测CIK细胞免疫表型及其表面IL021受体（IL-21R）、FasL、细胞内穿孔素和颗粒酶B的表达；半定量RT—PCR法检测CIK细胞IFN-γ，TNF-α、TNF-β、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、FasL和NKG2DmRNA的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达；Westernblot法检测CIK细胞JAK—STAT信号途径的变化。结果在IL-21作用下，CIK细胞的产生由（17．5±4．7）％升至（26．5±2．1）％，对K562细胞的杀伤作用由（22．8±2．8）％升至（44．6±8．3）％，CIK细胞表面IL-21R的表达增加约2倍。CIK细胞IFN-1mRNA的表达由0．3760±0．2358升至0．7786±0．2493，TNF-αmRNA的表达由0．6557±0．1598升至1．3145±0．2136，穿孔素mRNA的表达由0．6361±0．1457升至0．9831±0．1265，颗粒酶BmRNA的表达由0．4084±0．1589升至0．7319±0．1639，FasLmRNA的表达由0．4015±0．2842升至0．7381±0．2568，差异均有统计学意义。CIK细胞表面FasL的表达水平，加IL-21组（0．19％）与未加IL-21组（0．04％）相比，差异有统计学意义。CIK细胞内穿孔素的表达由35．28％升至53．16％，颗粒酶B的表达由43．16％升至78．82％，培养上清中IFN．1的表达由（25．8±6．1）ng／L升至（56．0±2．3）ng／L，TNFα的表达由（5．64±0．61）μg/L升至（15．14±0．93）μg／L。STAT3和STAT5b的表达增加。结论人源IL-21可增强外周血来源CIK细胞抗白血病作用，此作用是通过增加其受体的表达，增加穿孔素、颗粒酶B、FasL、IFN-γ和TNFα的表达而实现的，JAK—STAT细胞信号途径的激活是此种作用的机制之一。提示IL-21在增强白血病免疫治疗中具有潜在的临床应用前景。