上调PTEN基因表达对白血病耐药细胞系K562／ADM细胞化疗增敏作用的实验研究

目的探讨上调PTEN表达对白血病耐药细胞化疗增敏的作用及其机制。方法将PTEN真核表达质粒导入耐阿霉素（ADM）的K562细胞（K562／ADM细胞）中，采用Westernblot和RT-PCR方法检测PTEN基因在转染前后细胞的表达，MTF法检测ADM对转染前后K562／ADM细胞存活率的影响，应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率，采用重组人半胱天冬酶-3（caspase-3）活性定量试剂盒分析caspase-3的活性，Westernblot检测自噬微管相关蛋白轻链3（LC3）-Ⅰ／Ⅱ、自噬相关蛋白Bec-linl、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶（p-p70S6K）的表达，单丹磺酰戊二胺（MDC）染色和透视电镜观察自噬泡的情况。结果①与未经处理和转染空载体的K562／ADM细胞相比，转染PTEN基因的K562／ADM细胞组PTENmRNA和蛋白表达水平均增高；②转染PTEN基因使K562／ADM细胞对ADM的敏感性增强，与转染空载体细胞比较，其细胞存活率从（94．07±2．60）％降低到（53．83±4．20）％，细胞凋亡率从（11．89±1．70）％增加到（43．69±2．30）％；经caspase-3抑制剂（Z-DEVE-FMK）预处理后，未能完全阻止ADM对细胞的毒性作用；③ADM处理细胞12和24h后，转染PTEN基因的K562／ADM细胞casepase-3活性（2．27±0．13和3．15±0．08）均明显高于转染空载体组（1．19±0．14和1．48±0．06）（P值均〈0．05）；④与转染空载体组比较，转染PTEN基因的K562／ADM细胞LC3-Ⅱ和Beclinl的蛋白表达水平分别增加83％和18％，p-Akt和p-p70S6K的蛋白表达水平分别降低96％和87％；⑤增加PTEN的表达，细胞内自噬泡较转染空载体组明显增多。结论上调PTEN基因表达能明显增加K562／ADM细胞对ADM的敏感性，该作用可能与上调PTEN基因表达、抑制P13K／Ak∥mTOR通路活性从而促进细胞凋亡和自噬的发生有关。