辐射诱导人骨髓间充质干细胞自噬反应的研究

R329.2; 目的 观察辐射条件下人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)的自噬反应。方法 应用Annexin- Ⅴ/PI双标法检测0、2、4、8、10Gy X线照射后4 h hBMMSC凋亡率和坏死率的变化;通过透射电子显微镜观察0、8、10Gy X线照射后4h的hBMMSC自噬形态学变化，以经典的自噬诱导剂雷帕霉素处理组作为阳性对照，并应用RT-PCR技术检测自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3，MAPLC3，简称为LC3)mRNA表达。结果 在低于8 Gy的剂量范围内，hBMMSC的凋亡率随照射剂量的增加而降低，坏死率和死亡(凋亡+坏死)率随照射剂量的增加而升高，但升高幅度较小。当剂量增至10 Gy时，凋亡率升至最高，而坏死率和死亡率的升高幅度增大。并且整体凋亡率变化比坏死率明显。透射电镜观察显示正常对照组中偶见自噬泡(自噬体和自噬溶酶体合称为自噬泡)出现，而照射组及阳性对照组中均可见明显自噬泡聚集，8 Gy照射组的自噬泡阳性细胞比例为(71.67 +7.64)％，高于10 Gy照射组的(56.67±7.64)％。RT-PCR检测结果显示正常对照组中Beclin1 mRNA和LC3 mRNA表达水平均很低，而照射组及阳性对照组中两个基因的表达明显升高，且8 Gy照射组(0.518±0.005、0.408±0.006)表达水平高于10 G照射组(0.441±0.002、0.360±0.019)％。结论 辐射应激可以诱导hBMMSC的自噬反应，在一定照射剂量范围内，自噬可能对hBMMSC有放射保护作用。