血浆外泌体样小体免疫调节作用的初步研究

目的 鉴定血浆中外泌体（exosomes）样小体,研究其生物学特性及免疫调节作用.方法 利用多次超速离心结合膜超滤的方法,从健康供者血浆中分离纯化外泌体样小囊泡.采用透射电镜从形态学方面鉴定此囊泡为外泌体,用流式细胞术检测其生物学特性.通过磁珠分选从健康供者外周血单个核细胞中分选CD4^＋T细胞及CD4^＋CD25^＋CD127^low调节性T细胞（Treg）,外泌体样小体与CD4^＋T细胞或Treg细胞共孵育,通过增殖和凋亡实验分析其免疫调节作用.采用流式细胞术检测外泌体样小体与Treg细胞共孵育后,Treg细胞中Wnt经典信号转导通路中磷酸化β-catenin的变化.结果 人血浆中的外泌体样小体与外泌体在形状和大小方面均相似,表达外泌体的标志性蛋白CD63和CD81,还表达MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD86等.血浆外泌体样小体与CD4^＋T细胞孵育后能抑制CD4^＋T细胞的增殖,且呈剂量依赖性.血浆外泌体样小体与Treg细胞孵育后,Treg细胞的生存时间延长,培养14 d后与血浆外泌体样小体共孵育的Treg细胞存活率为57.07%,而对照Treg细胞存活率为30.91%.RT-PCR检测出Treg细胞有Frizzled受体FRZ2、3、4及LRP6 mRNA表达（相对灰度值分别为48.50、34.84、23.85、49.73）,而血浆中外泌体样小体携带Wnt分子.与血浆外泌体孵育后,Treg细胞磷酸化β-catenin平均荧光强度降低（由20.06±2.99降低到12.41±2.08）,抗凋亡基因bcl-2明显上调（相对灰度值由0.45上调到84.97）.结论 血浆中存在外泌体样小体,表达免疫调节分子,并且体外能够抑制活化的CD4^＋T细胞增殖,通过Wnt信号转导途径延长Treg细胞生存时间.