K562细胞nm23-H1基因沉默对其向巨核细胞分化的影响

目的探讨nm23-H1沉默对K562细胞向巨核细胞分化的影响。方法采用Lipo-fectamine2000将靶向nm23-H1基因的RNA干扰质粒pSilencer^TM 4．1-CMV-sinm23及空质粒转染K562细胞，经G418筛选建立该基因稳定下调的K562细胞（K562-sinm23细胞）及空质粒转染K562细胞（K562-siNC细胞），实时定量PCR、免疫组织化学、蛋白印迹反应等方法证实了nm23基因沉默细胞构建成功。NBT还原比色试验检测细胞分化能力。流式细胞术检测在诱导剂佛波酯作用下K562-sinm23细胞表面巨核细胞分化抗原GPⅡb-Ⅲa（CD41）的表达。蛋白印迹法检测细胞在佛波酯诱导后ERK1／2磷酸化活性。结果与K562细胞和K562-siNC细胞比较，pSilencer^TM 4．1-CMV-sinm23能够沉默内源性nm23-H1 mRNA的表达，基因水平和蛋白水平的沉默效率分别达到75％和70％。经佛波酯诱导，与K562-siNC细胞比较K562-sinm细胞的分化能力明显增强（NBT还原能力A值分别为0．23±0．05和0．31±0．07）。nm23-H1基因调控K562细胞向巨核细胞分化与ERK1／2磷酸化活性增强有关。结论成功构建了nm23-H1基因稳定下调表达的K562细胞株，并且证明nm23-H1参与了K562细胞向巨核细胞系的分化。