范可尼贫血患者FANCA突变子的构建及其功能

目的研究范可尼贫血（FA）患者FANCA蛋白的表达及其突变子的功能。方法用3例来源于FA-A型患者的外周血淋巴细胞建立的细胞系作为研究对象，分别提取其细胞总蛋白、细胞胞质蛋白和细胞核蛋白，用Westernblot法分析FANCA蛋白的表达及其在细胞胞质和细胞核内的分布，对1例有FANCA截短型蛋白表达的FA患者，构建了质粒突变子并用哺乳动物细胞双杂交方法检测FANCA基因突变子（外显子5缺失）与FANCG蛋白的相互作用。结果用兔抗人抗体检测时，3例FA-A患者均无FANCA蛋白的表达，而用鼠抗人抗体检测时，有1例患者可检测到截短型FANCA蛋白表达，但此截短型FANCA蛋白不能从细胞胞质转运到细胞核，也不能在哺乳动物细胞双杂交系统中与FANCG蛋白相互作用。结论3例FA-A患者中，2例无FANCA蛋白表达，1例可表达截短型FANCA蛋白，但无正常FANCA蛋白功能，进一步证实其FANCA基因突变为致病性病理突变，FANCA基因外显子5参与了与FANCG的相互作用。