异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的分子特征

R3; 目的 研究异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后细胞免疫重建过程中T细胞克隆的T细胞受体β链可变区互补决定区3(TCRBV CDR3)分子特征.方法 应用RT-PCR扩增24例不同类型白血病患者allo-HSCT后及5名正常供者外周血的TCRBV 24个家族的基因序列,通过基因扫描(Genescan)的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质及计算β链可变区(BV)家族的利用率.对于寡克隆表达的T细胞克隆进一步电泳,得到单克隆条带并测序,获得一组与移植物抗宿主病(GVHD)或巨细胞病毒(CMV)直接相关的TCRBV CDR3的分子.结果 在移植后2个月至19个月,单倍型骨髓移植的9例患者在6～14个BV家族中有表达,多克隆表达率为33%,其余为单克隆或寡克隆表达.无血缘关系外周血干细胞移植的5例患者在10～15个BV家族中有表达,多克隆表达率为45%.同胞全相合骨髓移植的10例患者在9～16个BV家族中有表达,多克隆表达率为48%.单克隆或寡克隆增生分布在24个不同的BV家族,未见共用的BV家族.单倍型骨髓移植后细胞免疫恢复迟于其他两组.其中2例患者在移植后2个月、移植后3个月检测TCRBV,发现移植后随时间增加BV家族的利用增加,CDR3的多克隆群体增多.得到的23条与GVHD及CMV直接相关的TCRBV CDR3分子,经过生物信息学比较发现,在相同的BV家族内,不同患者中可以出现结构相似的CDR3氨基酸分子,也可以完全不同;不同BV家族的CDR3分子相差较大,未发现共同使用的氨基酸基序.结论 不同类型白血病患者allo-HSCT后19个月内,TCRBV家族的利用仍处于不均一状态.单倍型骨髓移植后细胞免疫恢复迟于其他两组.得到的一组与GVHD及CMV相关的单克隆或双克隆T细胞CDR3分子,在相同的BV家族内,不同患者出现结构相似的CDR3氨基酸分子;不同BV家族的CDR3分子之间未发现共同使用的氨基酸基序.