M1-GS RNA靶向作用于K562细胞的研究

R3; 目的探讨带有导引序列的核糖核酸酶P亚单位M1 RNA(M1-GS RNA)转染白血病细胞株K562细胞后对bcr-abl融合基因mRNA及其表达产物的作用效应.方法含有针对bcr-ablmRNA的M1-GS RNA表达质粒pAVGS4,以X-treme Q2介导转染K562细胞,设置空载体组作为对照,分别在转染后24,48,72和96 h收集细胞,以Trizol试剂抽提总RNA,通过RT-PCR检测转染后不同时间bcr-abl mRNA的变化;在转染后48和96 h,抽提总蛋白质,通过Western blot检测癌基因的表达产物P210在不同时间的变化.利用半固体琼脂培养方法观察pAVGS4对K562细胞集落形成的影响.结果pAVGS4转染K562细胞后24,48,72和96 h RT-PCR结果显示:在转染后24 h,随时间的推移,实验组细胞内bcr-abl mRNA含量下降近1个对数级,72和96 h实验组细胞内bcr-abl mRNA的含量接近,而对照组无明显改变.Western blot结果显示:实验组在48 h的灰度值是同期对照组的10.4%,96 h时为6.7%.K562细胞集落形成分析显示96 h后集落抑制率达81.3%.结论M1-GSRNA可以有效、特异地破坏bcr-abl mRNA,显著下调P210的表达,抑制K562集落形成.