嵌合体的动态定量检测在异基因造血干细胞移植中的应用

目的建立荧光标记的多重PCR扩增短串联重复序列(SIR—PCR)结合毛细管电泳，定量检测供体细胞(DC)嵌合率的方法，并探讨该方法的连续定量检测对异基因造血干细胞移植(alle-HSCT)后转归的预警作用。方法采集31例接受骨髓移植(BMT)或非清髓外周血干细胞移植(NST)患者移植前、移植后不同时段的外周血或骨髓。DNA样本用Profiler Plus商品化试剂盒扩增后，用ABI 310遗传分析仪进行毛细管电泳，确定基因位点及峰面积，根据供受体基因型的差异选择嵌合率计算公式。结果31例患者中15例(48．4％)为性别相合移植，只能通过STR-PCR进行嵌合体的定量分析；性别不合移植患者用STR-PCR和荧光原位杂交两种方法定量测得的DC嵌合率一致；31对供受体中能区别出供受差别的SIR位点有6．7(2—10)个，所有患者均在移植后7天(+7天)出现供体来源的细胞，BMT组+7天、+14天和+1个月DC中位数均明显低于NST组，而在移植中后期无显著性差异。+21天时BMT和NST患者均达稳定嵌合，DC在92％以上；中位随访17(3．5—29．0)个月，26例患者DC≥90％，均获得持久植入，至今均为无白血病生存。另有5例患者出现不稳定混合嵌合(MC)状态(DC为27．3％-62．7％)，其中4例复发，1例出现移植物被排斥。上述5例患者均在出现临床症状前发生DC下降；供体细胞完全嵌合(FDC)组移植物抗宿主病(GVHD)的发生率明显高于MC组。结论动态定量检测DC可用于移植动力学研究，对移植物早期植入或被排斥、本病复发以及GVHD均有预警作用，对实施临床干预治疗有指导价值。