人参皂苷Rb1通过腺苷酸活化蛋白激酶通路改善乳鼠缺氧心肌细胞自噬能力分析

R329.2; 目的 探讨人参皂苷Rb1(Gs-Rb1)能否改善氯化钴(CoCl2)诱导的心肌细胞自噬能力以及该效应是否通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路介导.方法 将1～3 d Wistar乳鼠心肌细胞在Dulbecco改良培养基(含10％胎牛血清)中同步孵育3d后随机分为对照组、缺氧组(氯化钴)、Gs-Rb1组(Gs-Rb1+氯化钴)、Ara-A组(Ara-A+氯化钴,Ara-A为AMPK活性抑制剂)、Ara-A+ Gs-Rb1组(Ara-A+ Gs-Rb1+氯化钴)、AICAR组(AICAR+氯化钴,AICAR为AMPK激活剂)和AICAR+ Gs-Rb1组(AICAR+ Gs-Rb1+氯化钴).氯化钴、Gs-Rb1、Ara-A和AICAR干预浓度分别为500 μmol/L、200 μmol/L、500 μmol/L和1 mmol/L.分别干预12 h后,噻唑蓝法检测细胞存活率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平,DCFH-DA ELISA法检测AMPK活性,蛋白质印迹法测定心肌细胞自噬标记蛋白Atg4B、Atg5、Beclin1、Atg7、LC3BⅡ、LC3B Ⅰ、P62表达.结果 缺氧组心肌细胞存活率明显低于对照组[(0.63±0.03)比(0.98±0.03)],Gs-Rb1组、AICAR组和AICAR+ Gs-Rb1组心肌细胞存活率[(0.82±0.02)、(0.79±0.01)、(0.83±0.02)]均明显高于缺氧组,Ara-A+ Gs-Rb1组心肌细胞存活率[(0.74±0.01)]明显低于Gs-Rb1组(均P＜0.05).Gs-Rb1组、AICAR组和AICAR+ Gs-Rb1组cTnI水平均明显低于缺氧组[(118±30)、(116±10)、(97±11)ng/L比(188±45) ng/L],Gs-Rb1组cTnⅠ水平明显低于Ara-A+ Gs-Rb1组[(161±20)ng/L](均P＜0.05).缺氧组、Ara-A组和Ara-A+ Gs-Rb1组心肌细胞AMPK活性明显低于对照组[(2.09±0.05)、(0.07±0.00)、(0.09±0.00)比(7.11±0.03)],Gs-Rb1组、AICAR组、AICAR+Gs-Rb1组AMPK活性[(4.38±0.03)、(4.09±0.01)、(4.47±0.01)]明显高于缺氧组(均P＜0.05)