腹水来源卵巢上皮性癌细胞系中侧群细胞的分离、鉴定及耐药性分析

目的由已建立的腹水来源卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系中分离侧群（SP）细胞，鉴定SP细胞作为肿瘤干细胞样细胞的生物学特征，并对其进行耐药性分析。方法采用流式细胞仪分选该卵巢癌细胞系中的SP细胞；分别在体外分化条件下培养SP及非侧群（NSP）细胞，并分别测定其SP细胞比例用于比较其体外分化及自我更新能力；将SP及NSP细胞接种于非肥胖性糖尿病－严重免疫缺陷（NOD—SCID）小鼠的皮下及腹腔，比较SP及NSP细胞的成瘤率；采用活细胞计数法（CCK-8法）检测SP、NSP及未分选卵巢癌细胞（未分选细胞）对顺铂的耐药性，以50％抑制浓度（IC50）表示。结果分选前的腹水来源卵巢癌细胞中，SP细胞比例为（4．81±0．43）％，从该卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞。SP细胞经体外分化培养，3周后其中sP细胞比例为（4．89±0．33）％，与分选前SP细胞比例相近，两者比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；而NSP细胞经体外分化培养，3周后其中sP细胞比例仅为（0．10±0．03）％，明显低于分选前SP细胞比例（P〈0．01）。皮下接种1．0×104个sP细胞6周后3只小鼠全部成瘤，皮下成瘤率为3／3，而接种1．0×104个NSP细胞12周后3只小鼠均未成瘤，皮下成瘤率为0，两者皮下成瘤率比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；同时，腹腔接种相同数量的SP、NSP细胞后其成瘤能力与皮下接种后相似；原发肿瘤与移植瘤经HE染色和免疫组化染色显示，原发肿瘤与移植瘤均为卵巢低分化浆液性乳头状囊腺癌，均表达卵巢浆液性乳头状囊腺癌标志物CA125。SP、NSP、未分选细胞的顺铂IC50值分别为（2．33±0．14）、（1．60±0．04）、（1．81±0．03）μg／m]，SP细胞的顺铂IC50值明显高于NSP及未分选细胞（P〈0．05）；以上述未分选细胞的顺铂IC50进一步处理后，未分选细胞中SP细胞比例为（40．10±4．22）％，明显高于顺铂处理前的SP细胞比例[为（4．81±0．43）％；P〈0．01]；以上述SP细胞的顺铂IC50进一步处理后，SP细胞的存活率为（58．7±3．3）％，再予维拉帕米拮抗后其存活率下降为（7．2±1．3）％，两者比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论腹水来源卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞，分离出的SP细胞占整个肿瘤细胞群体中的极少数，具有自我更新和分化能力，可再现原发