稳定转染短发夹状RNA后子宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因表达的变化

目的探讨宫颈癌细胞株HeLa细胞稳定转染表达短发夹状RNA（shRNA）的质粒后，HeLa细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因（HPV18E6）表达的变化。方法实验组将本实验室前期构建的可遗传性表达HPV18E6 shRNA的pE6—1shRNA质粒和含E6基因突变点的pE6-2shRNA质粒分别转染HeLa细胞，对照组以空质粒pSUPER和不加质粒的脂质体分别转染HeLa细胞。稳定转染后，氨基糖苷抗生素（G418）筛选阳性细胞克隆，RT—PCR技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法分别检测HeLa细胞中HPV18E6mRNA和蛋白表达的变化。结果稳定转染后，G418筛选，实验组HeLa细胞有新的阳性细胞克隆形成，而对照组HeLa细胞最终全部死亡。实验组转染pE6—1shRNA质粒的HeLa细胞中HPV18E6 mRNA表达水平为0．76±0．28，明显低于对照组转染脂质体者（1．14±0．45）和转染pSUPER质粒者（1．12±0．23，P〈0．05）；HeLa细胞中HPV18E6蛋白阳性表达强度较对照组转染脂质体者弱。实验组转染pE6—2shRNA质粒的HeLa细胞中HPV18E6mRNA和蛋白表达水平分别与对照组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论稳定转染表达HPV18E6 shRNA的质粒后，宫颈癌细胞中HPV18E6 mRNA和蛋白表达明显受到抑制。