志贺毒素2A-促黄体生成素释放激素重组毒素的构建、表达及其意义

R3; 目的构建一种对子宫颈癌HeLa细胞有特异性杀伤作用的志贺毒素2A-促黄体生成素释放激素(Stx2A-LHRH)重组毒素,以探索其成为新型靶向药物的可能性.方法用聚合酶链反应(PCR)技术扩增Stx2A-LHRH DNA片段,克隆至pET-20b(+)质粒中,酶切鉴定及测序证明成功地构建了重组毒素表达质粒pET-Stx2A-LHRH,将其转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株后,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳及凝胶薄层扫描分析Stx2A-LHRH重组毒素的表达情况.倒置显微镜下观察Stx2A-LHRH对HeLa细胞的作用.结果 SDS-PAGE电泳分析显示,在实验上清液中,诱导出相对分子质量为38 000的融合蛋白,说明该载体表达了Stx2A-LHRH重组毒素,且其表达量占上清液中总蛋白的10.32%.加入Stx2A-LHRH重组毒素后,宫颈癌HeLa细胞几乎全部死亡.结论成功构建了Stx2A-LHRH重组毒素,为研制治疗子宫颈癌的新型药物提供了理论依据.