Cajal间质细胞胃动素受体的表达

R72; 目的 研究Cajal间质细胞(ICC)上是否有胃动素受体表达.方法 以10日龄仔兔小肠为组织来源,采用Ⅱ型胶原酶酶解法并结合密度离心法分离、培养细胞;对培养的ICC细胞,采用免疫细胞化学的方法 ;应用ICC特异的c-kit抗体进行免疫荧光染色后,用荧光显微镜对其进行鉴定;应用特异性胃动素受体抗体(anti-GPR38)、c-kit蛋白抗体以及细胞核染料(hoechst33342)联合对培养的细胞进行免疫荧光染色;以流式细胞仪分选的ICC为靶细胞,分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)技术,将提取的细胞总RNA,经反转录后扩增,行3%琼脂糖凝胶电泳;提取的细胞总蛋白,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),转膜,抗体杂交,发光检测;从基因和蛋白水平来验证ICC是否表达胃动素受体.结果 特异性的c-kit蛋白抗体荧光染色鉴定成功培养出兔肠道ICC;细胞免疫荧光三标实验显示ICC胞膜上存在胃动素受体表达;流式细胞仪分析培养的细胞中c-kit阳性细胞比率为64.3%,流式细胞仪分选出阳性细胞分别为6.7×105个和5.6×106个;对分选出的ICC提取的总RNA和总蛋白分析检测显示胃动素受体mRNA以及受体蛋白定性分析结果 均为阳性.结论 兔肠道ICC上有胃动素受体的表达,ICC在胃动素促进肠道运动中起到了重要的作用.