汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型研究

R37; 目的研制新的汉坦病毒核衣壳工程抗原，建立肾综合征出血热病毒检测和基因分型方法。 方法以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段，并使它们在T7系统进行融合表达和非 融合表达。用另组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)，检测我国不同地区由8种主要宿主分 离的37个汉坦毒株，2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本。对其中20个毒株的PCR扩增产物先 后用Rsa Ⅰ和HindⅢ作二级酶切，建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(RT-PCR- RFLP)分型法。 结果非融合表达产量虽不及融合表达高，但以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被 抗原，其工作浓度均达1：10000，显示出良好的生物活性。RT-PCR检测结果表明，所有的毒株扩增出汉坦 特异性核酸组份(299 bp或577 bp)。用RT-PCR-RFLP法分型，上述毒株被定为汉滩型的9株，汉城型的 8株，余3株未能定型。 结论非融合表达的小分子抗原生物活性较高，有望替代天然抗原用于HV抗原抗体检测。RT-PCR法与 cELISA法比较，二者阳性检出率分别为100％和84.6％，符合率为84.6％，但前者比后者敏感性高15.4％。 RT-PCR-RFLP分型法与血清学分型法所得结果具有很高的符合率，但RFLP法的分型率为85％(17/20)， 血清法的分型率为55％(11/20)，前者比后者高30％。