产油核桃内生细菌乙酰辅酶A羧化酶acb基因克隆及优化表达

产油核桃内生细菌乙酰辅酶A羧化酶acb基因克隆及优化表达

Q78%TS222.1; 为了探究细菌异质性乙酰辅酶A羧化酶β亚基生物活性及其对乙酰辅酶A羧化酶酶活影响,以高产油核桃内生细菌B.subtilis HB1310基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增其乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基(β-CT)基因(acb基因),构建pET-28a-acb载体并在E.coli BL21中表达,进一步对乙酰辅酶A羧化酶acb基因的诱导表达条件进行了优化.结果表明:乙酰辅酶A羧化酶acb基因在E.coli BL21中实现了表达,分子质量在25～35 kDa之间;重组蛋白最佳诱导表达条件为诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度1.0 mmol/L、诱导时...

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Veröffentlicht in:中国油脂 2023, Vol.48 (4), p.99-104
Hauptverfasser: 许思远, 张永贵, 赵沛, 曹娟娟, 张琴
Format: Artikel
Sprache:chi
Online-Zugang:Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:Q78%TS222.1; 为了探究细菌异质性乙酰辅酶A羧化酶β亚基生物活性及其对乙酰辅酶A羧化酶酶活影响,以高产油核桃内生细菌B.subtilis HB1310基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增其乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基(β-CT)基因(acb基因),构建pET-28a-acb载体并在E.coli BL21中表达,进一步对乙酰辅酶A羧化酶acb基因的诱导表达条件进行了优化.结果表明:乙酰辅酶A羧化酶acb基因在E.coli BL21中实现了表达,分子质量在25～35 kDa之间;重组蛋白最佳诱导表达条件为诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度1.0 mmol/L、诱导时间6 h、诱导初始pH 8.0,在此条件下工程菌的乙酰辅酶A羧化酶活性可达(4.11±0.03)U/mL,较野生菌提高39.7％.综上,乙酰辅酶A羧化酶β-CT为具有较好生物活性的乙酰辅酶A羧化酶亚基.
ISSN:1003-7969
DOI:10.19902/j.cnki.zgyz.1003-7969.220108