生物素标记奶牛冷冻精子膜蛋白的提取、纯化与初步鉴定

本文通过利用膜不透性的生物素试剂Sulfo-NHS-SS-Biotin原位标记完整的奶牛精子细胞表面蛋白质，通过验证生物素与精子细胞表面的特异性结合，然后裂解细胞，用中性亲和素琼脂糖树脂纯化生物素化的蛋白质。最后用TCA浓缩膜蛋白。实验结果表明生物素特异的与精子细胞表面膜蛋白结合，通过中性亲和素琼脂糖树脂纯化出来的膜蛋白浓度较低，通过TCA蛋白浓缩后，膜蛋白浓度有了明显提升。建立了奶牛精子膜蛋白的生物素标记验证体系，通过提取、亲和纯化、TCA浓缩等步骤成功的得到了较高浓度的奶牛精子膜蛋白。