猪ECR1-Like免疫黏附功能对PAMs捕获GFP-E.coli的影响

[目的]探讨猪红细胞类Ⅰ型补体受体(erythrocyte complement receptor type 1-like,ECR1-like)免疫黏附功能是否能够促进猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)捕获致敏基因工程菌(GFP-Escherichia coli,GFP-E.coli),以期阐释猪红细胞免疫的分子机理及红细胞免疫在机体先天免疫中的作用.[方法]利用流式细胞术、菌落-平板计数及RT-PCR技术检测PAMs捕获的GFP-E.coli的水平,分析猪ECR1-like免疫黏附对PAMs捕获GFP-E.coli 的影响;运用流式细胞术、细胞免疫荧光化学技术检测猪ECR1-like免疫黏附的致敏GFP-E.coli被PAMs移除后,猪红细胞免疫黏附功能的变化及猪ECR1-like数量的变化.[结果]流式细胞术检测发现猪红细胞黏附组较空白对照组中的PAMs平均荧光强度显著提高(P＜0.001),且PAMs阳性细胞率也显著提高(P＜0.05);菌落涂板计数发现红细胞黏附组较空白对照组PAMs捕获GFP-E.coli情况显著增强(P＜0.05);RT-PCR检测发现,红细胞黏附组PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著高于空白对照组(P＜0.01);进一步阻断猪红细胞表面的CR1-like,流式细胞术检测发现PAMs平均荧光强度降低至256 301.56 ±9 208.85(P＜0.001),PAMs阳性细胞率降低至(88.32±0.92)％(P＞0.05),菌落平板计数发现PAMs捕获GFP-E.coli情况减弱为(136 666±8 818)CFU/mL(P＜0.05),RT-PCR检测发现PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著减少(P＜0.01);利用细胞流动循环互作技术发现:猪红细胞免疫黏附致敏GFP-E.coli的平均荧光强度由循环前2 892.18±47.76降至 2 407.43±141.78(P＜0.05),阳性细胞率由循环前(20.58±0.36)％降至(17.39±0.23)％(P＜0.001),黏附水平显著低于循环前,与此同时,间接免疫荧光试验结果显示:试验组循环后猪ECR1-like平均荧光强度由循环前344.33±37.92降低至 291.56±11.99(P＜0.05),阳性细胞率由(30.20±1.24)％减少至(28.27±