FATP1对山羊肌内脂肪细胞的促进作用

[背景]脂肪酸转运蛋白 1(FATP1)能够促进哺乳动物脂肪酸摄取,该过程对维持机体脂代谢平衡十分重要,也对家畜的肉质好坏有着重要影响.[目的]通过获得山羊FATP1的CDS区序列,检测该基因在山羊不同组织中的表达量,探究其对山羊肌内脂肪细胞脂质代谢的影响,为进一步揭示 FATP1在山羊脂代谢中的作用机制提供参考,为山羊的遗传育种改良提供理论依据.[方法]利用RT-PCR方法克隆获得山羊FATP1的CDS区序列,利用在线工具分析其亲疏水性、跨膜区域、信号肽等生物学特性,并构建其氨基酸序列系统进化树.利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测FATP1在山羊不同组织中的表达水平,构建其组织表达谱.利用构建的真核表达载体和筛选出的 siRNA 对山羊肌内脂肪细胞进行FATP1 过表达和干扰处理,通过油红O染色和甘油三酯测定检测FATP1过表达和干扰后对山羊肌内脂肪细胞脂质沉积的影响,并通过RT-qPCR技术进一步探究该基因过表达和干扰后对脂质代谢相关基因表达的影响.[结果]克隆获得了FATP1CDS区 1 941bp,共编码 646 个氨基酸残基,预测其分子式为 C3196H5026N884O898S25,推测该蛋白为碱性疏水稳定蛋白.三级结构预测显示,山羊与绵羊的 FATP1 蛋白质三级结构相似,而与牛的 FATP1 蛋白质三级结构略有不同.氨基酸序列系统进化树分析显示,山羊FATP1 与绵羊亲缘关系最近.RT-qPCR检测发现FATP1在山羊小肠中表达量最高.油红O染色及甘油三酯测定表明过表达 FATP1 后山羊肌内脂肪细胞内脂滴数量增多,脂质含量增加,而干扰 FATP1 后则得到了相反的结果.进一步检测脂质代谢相关基因的表达变化,发现在山羊脂肪细胞中过表达FATP1后,脂肪酸合成、转运等相关基因AGPAT6(P＜0.01)、PLIN1(P＜0.01)、DGAT2(P＜0.01)、FADS2(P＜0.01)、FADS1(P＜0.01)、ACSL1(P＜0.01)及 ELOVL3(P＜0.05)的表达水平显著升高,而脂解相关基因ACOX1(P＜0.01)的表达水平则显著降低;干扰FATP1后,脂肪酸转运、延长等相关基因SCD5(P＜0.01)、FABP3(P＜0.01)和ELOVL3(P＜0.05)的表达量显著下降,脂解相关基因ACOX1(P＜0.01)和 CPT1B(P＜0.05)的表达量显著上升.[结论]