养殖场分离的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌基因突变研究

【目的】探讨从养殖场动物、环境和饲养员分离的大肠杆菌的gyrA和paTC基因突变特征。【方法】用琼脂稀释法测定环丙沙星和恩诺沙星对菌株的最小抑菌浓度。PCR扩增gyTA和parC基因的喹诺酮耐药决定区，扩增的片段长度分别为525bp和487bp，PCR产物直接测序。【结果】在63株突变株中，在GyrA亚基发生的氨基酸替代有Ser83→Leu（62株）和Asp87→Asn（52株）、Asp87→Tyr（2株）、Asp87→HiS（2株）；ParC亚基的氨基酸替代有Ser80→Ile（47株）、Ser80→Arg（2株）和Glu84→Val（3株）、Glu84→Lys（4株）、Glu84→G1y（5株）、Glu84→Ala（1株）。环丙沙星对菌株的MIC小于0．125μg·ml^-1时，gyrA和ParC亚基均没有任何变异；环丙沙星的MIC为0．125～0．25μg·ml^-1时，GyrA亚基出现单一氨基酸替代；环丙沙星的MIC为0．5～32μg·ml^-1时，出现GyrA83位和87位双替代或者GyrA83和ParC80位双替代；环丙沙星的MIC为4～128μg·ml^-1，发生GyrA双替代和ParC单替代；环丙沙星的）dIC在16～128μg·ml^-1，发生GyrA双替代和ParC双替代。【结论】不同来源的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌GyrA和ParC具有多种氨基酸替代类型，而且GyrA和ParC突变位点的数量与菌株对氟喹诺酮类耐药水平呈正相关。