猪链球菌2型MRP与EPF基因串联表达蛋白及其免疫保护作用

根据猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2，SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein，MRP)和胞外蛋白因子(extracellular protein factor，EPF)的基因序列，各设计合成一对引物，以猪链球菌2型江苏分离株瓣1的基因组为模板，扩增mrp基因1801～2513位序列和cpf基因1783～2563位序列，分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后，提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化，通过PCR串联两片段，将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中，重组质粒转化入大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白。用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印，结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位。用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔，以最小致死量猪链球菌强毒株551-1攻击，兔的存活率达50％(2／4)，存活率明显高于单个表达产物。证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原。