柔嫩艾美耳球虫BJ株TA4基因的表达及电泳分析

柔嫩艾美耳球虫BJ株TA4基因的表达及电泳分析

S8; 球虫子孢子表面抗原TA4(25kD)是通过二硫键连接8和17 kD 2条多肽形成的,在孢子化后期合成.E.tenella BJ株的TA4基因同国外株的同源性为99%.本试验进行了TA4基因的原核融合表达,并对表达蛋白的SDS-PAGE电泳特性进行探究.试验发现,以pGEX-KG为载体,用IPTG可诱导TA4基因在E.coli BL21(DE3)中的表达.SDS-PAGE表明,融合蛋白大小约43 kD,而非推测的51kD,诱导6 h的蛋白表达量即可达到较高水平,表达量约为31%.采用抗GST抗体进行Western b1otting,成功检测到了特异性条带.说明SDS-PAGE前的样品煮沸...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Veröffentlicht in:中国农业科学 2004, Vol.37 (8), p.1217-1221
Hauptverfasser: 吴绍强, 蒋金书, 刘群, 朱引洁
Format: Artikel
Sprache:chi
Online-Zugang:Volltext
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Beschreibung
Zusammenfassung:S8; 球虫子孢子表面抗原TA4(25kD)是通过二硫键连接8和17 kD 2条多肽形成的,在孢子化后期合成.E.tenella BJ株的TA4基因同国外株的同源性为99%.本试验进行了TA4基因的原核融合表达,并对表达蛋白的SDS-PAGE电泳特性进行探究.试验发现,以pGEX-KG为载体,用IPTG可诱导TA4基因在E.coli BL21(DE3)中的表达.SDS-PAGE表明,融合蛋白大小约43 kD,而非推测的51kD,诱导6 h的蛋白表达量即可达到较高水平,表达量约为31%.采用抗GST抗体进行Western b1otting,成功检测到了特异性条带.说明SDS-PAGE前的样品煮沸处理可使连接TA42条多肽的二硫键断裂,只有17 kD的多肽可与26kD GST蛋白结合.样品采用反复冻融法处理,加入还原型谷胱苷肽后,采用GST凝胶回收柱Sepharose 4B纯化的融合蛋白主要为51 kD的单一条带,煮沸变性后电泳,则43kD带含量增加.说明纯化过程可影响GST-TA4融合蛋白的特性.
ISSN:0578-1752
DOI:10.3321/j.issn:0578-1752.2004.08.024