体外诱导对氨基水杨酸高浓度耐药结核分枝杆菌及其突变位点研究

R52%R453; 目的:通过对实验室诱导产生的对氨基水杨酸(para-aminosalicylic acid,PAS)耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)和临床分离株进行全基因组测序,探索PAS的潜在作用机制和耐药性.方法:通过体外药物浓度梯度诱导法,将MTB标准菌株H37Rv诱导成标准耐PAS菌株及高水平耐药菌株,收集并保存每一代诱导菌株.用液体微孔板法检测上述诱导菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及交叉耐药情况,筛选耐药水平相似的临床分离株.通过对PAS耐药的实验室突变株和临床分离株进行全基因组测序,从基因水平上探索MTB对PAS的耐药机制.结果:本研究在体外建立了耐PAS的MTB耐药动态变化模型.全基因组测序结果显示,PAS耐药可能与3个位点突变直接相关,分别是plcC(Q462R)、folC(S150R)和1个thyA上游位点(3074495G→A).MTB对高水平的PAS耐药的产生除了基因突变因素以外,尚存在其他的调控机制.对PAS敏感和耐药的MTB临床分离株测序发现某些folC、thyA和thyX突变并非由PAS引起.结论:本研究构建的PAS耐药MTB菌株模型,为PAS耐药结核病研究和临床实践提供了理想的生物模型.全基因组测序分析在DNA水平上阐明了 MTB对PAS的耐药机制,尚存在其他的调控机制,仍需进一步研究.所得的与PAS耐药相关的基因突变也需要进一步的实验验证.