结核病新疫苗的免疫毒理学评价方法研究

目的建立疫苗评价用豚鼠免疫毒理学评价方法,并应用建立的评价指标对结核病新疫苗（耻垢疫苗）的免疫毒性进行初步评价。方法制备豚鼠过敏模型30只,阴性对照15只。建立豚鼠血清总IgG1抗体检测和外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清、支气管肺泡灌洗液上清,以及腹腔灌洗液中肥大细胞体外刺激培养上清中的过敏性介质（组胺和白三烯）含量的检测方法。将豚鼠分成3组,分别为过敏模型组、耻垢疫苗组和阴性对照组,每组6只,应用已建立的以上几种评价指标初步进行了结核病新疫苗（耻垢疫苗）的免疫毒性评价。结果以6μg/ml羊抗豚鼠IgG1抗体包被,待测血清稀释1∶105,以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗豚鼠IgG1抗体稀释1∶20 000的实验条件为豚鼠血清总IgG1抗体的最佳检测方法。外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清中,豚鼠过敏模型组和对照组中组胺含量分别为（99.37±15.34）nmol/L和（29.94±5.86）nmol/L;白三烯含量分别为（13.09±3.87）pg/ml和（2.22±0.53）pg/ml。支气管肺泡灌洗液上清组胺含量分别为（73.42±18.60）nmol/L和（31.00±12.09）nmol/L,白三烯含量分别为（123.20±16.57）pg/ml和（39.05±16.94）pg/ml。腹腔灌洗液中肥大细胞体外刺激培养上清中组胺含量分别为（39.59±12.94）nmol/L和（14.35±5.85）nmol/L,白三烯含量分别为（6.79±2.58）pg/ml和（3.09±1.18）pg/ml。以上3种不同组织来源的样本中,过敏模型组的组胺和白三烯含量与对照组相比差异均有统计学意义（组胺：t=12.60,t=5.41,t=5.20,P〈0.05;白三烯：t=8.46,t=9.15,t=3.85,P〈0.05）。应用以上方法评价结核病新疫苗未见免疫学毒理学异常反应。结论实验初步建立了免疫毒理学评价方法,以该方法评价耻垢疫苗未见免疫毒理学异常反应。