异基因T淋巴细胞诱导血管内皮细胞组织因子的表达

R318; 背景:血管内皮细胞是移植物抗宿主病中异基因T淋巴细胞的重要靶组织,而血管内皮细胞损伤、活化后组织因子表达显著增高.因此血管内皮细胞组织因子表达可能在移植物抗宿主病引起的组织损伤中发挥重要作用.目的:探讨异基因T淋巴细胞能否诱导血管内皮细胞组织因子表达及其分子机制.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2008-03/10在华中科技大学同济医学院免疫学实验室完成.材料:人原代脐静脉内皮细胞来源于美国Sciencecell公司.方法:密度梯度离心法分离健康志愿者外周血单个核细胞,分别用结合CD4和CD8抗体的磁珠阳性分选CD4~+T细胞和CD8~+T淋巴细胞.脐静脉内皮细胞经PBS充分洗涤后,异基因CD4~+和CD8~+T淋巴细胞以10∶1的比例加入脐静脉内皮细胞,以未与T淋巴细胞混合培养组为对照.将脐静脉内皮细胞分别与细胞通路阻滞剂-特异性Jun氨基末端激酶抑制剂、特异性p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂、特异性细胞外信号调节激酶抑制剂提前温育1 h,然后再与异基因CD4~+和CD8~+T淋巴细胞共培养,以未加入细胞通路阻滞剂为对照组.主要观察指标:实时定量PCR和流式细胞术检测异基因T淋巴细胞作用后脐静脉内皮细胞中组织因子在基因和蛋白水平的表达.Western blot方法检测脐静脉内皮细胞中丝裂原活化蛋白激酶的表达.结果:异基因CD4~+T淋巴细胞作用6,12,24 h后,脐静脉内皮细胞膜表面组织因子表达率及mRNA表达水平较对照组显著增高(P < 0.05).异基因CD8~+T淋巴细胞作用6,12,24 h后,脐静脉内皮细胞膜表面组织因子表达率及mRNA表达水平较对照组亦显著增高(P < 0.05).异基因CD4~+T淋巴细胞诱导12,24 h的脐静脉内皮细胞膜表面组织因子阳性表达率显著高于异基因CD8~+T淋巴细胞(P < 0.05).异基因T淋巴细胞作用后,脐静脉内皮细胞内磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和Jun氨基末端激酶表达增强,而磷酸化细胞外信号调节激酶表达无变化.特异性p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂和特异性Jun氨基末端激酶抑制剂可显著下调异基因T淋巴细胞诱导的组织因子表达,两者合用可完全阻滞组织因子的表达.结论:异基因T淋巴细胞通过Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导血管内皮细胞组织因子表达.