自体骨膜复合骨髓间充质干细胞移植修复免关节软骨缺损

背景：自体骨髓间充质干细胞及骨膜移植等方法由可促进关节软骨缺损的修复，但其各自的成软骨能力有限，治疗效果欠侍。目的：观察自体骨膜复合向软骨细胞诱导的骨髓间充质干细胞移植修复软骨缺损的疗效。设计、时间及地点：随机分组对照动物实验，于2005-08／2007-03在山西医科大学第二医院骨科实验室完成。材料：6-8月龄新西兰白兔18只，按随机数字表法分为3组，即骨膜复合骨髓间充质干细胞组、单纯骨膜组及空白对照组，每组6只12个膝关节标本。方法：骨膜复合骨髓间充质干细胞组采用胰酶消化法采集骨髓间充质干细胞进行贴壁培养，加入转化生长因子B，向软骨细胞进行诱导分化，同时进行PKH-26细胞膜免疫荧光标记。在全部兔双侧股骨内侧髁造成直径3mm，深度3mm的全层软骨缺损，骨膜复合骨髓间充质干细胞组、单纯骨膜组取同侧胫骨上段内侧骨膜，骨膜生发层朝向骨髓腔覆盖软骨缺损，骨膜复合骨髓间充质干细胞组先期缝合3针，向缺损区注入1×10^9骨髓间充质干细胞细胞悬液20uL，植入细胞后缝合最后1针。单纯骨膜组只进行单纯骨膜覆盖缺损处理；空白对照组只钻孔不作任何处理。主要观察指标：术后6，12周时，对缺损部位进行大体观察、组织学观察、Wakitani评分以及II型胶原免疫组化及原位杂交检测。结果：所有缝合骨膜未发现脱落，骨膜复合骨髓间充质干细胞组6周时，软骨缺损已由透明软骨样修复组织填充，12周时修复组织进一步改建，且修复组织中细胞主要为带有PKH．26荧光标记的植入细胞。单纯骨膜组缺损区修复组织为乳白色，表面光滑稍微凹陷，与周围正常软骨组织之间界限清晰；空白对照组缺损区多数比较凹陷，或缺损部位形状不规则，周围软骨组织断裂。术后6，12周时，骨膜复合骨髓间充质干细胞组Wakitani组织学评分均优于单纯骨膜组和空白对照组（P〈0．05），单纯骨膜组的评分优于空白对照组（P〈0．05）。同时，骨膜复合骨髓间充质干细胞组修复组织内细胞周围基质Ⅱ型胶原免疫组化及原位杂交染色阳性。证实修复组织内的细胞为植入细胞。结论：自体骨膜复合向软骨细胞诱导的骨髓间充质干细胞移植可形成透明软骨样修复组织修复关节软骨缺损。