大鼠皮肤的冷冻干燥保存

背景：细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据。 目的：用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性。 设计、时间及地点：观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成。 材料：体质量150g左右成年SD大鼠。海藻糖由Sigma公司提供。 方法：通过控制海藻糖浓度（50，300，500，800，1000mmol／L）、负载时间（0．5，4，7，9h）和温度[4℃、4-37℃（相转变）和37℃]，优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件。将负载海藻糖的皮肤置于含100g／L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育，程序冷冻仪以1℃／min的速率降温至-80℃后移入冷冻干燥机中进行冻干。将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素（CFDA）、四甲基偶氮唑盐（MTT）检测皮肤活性，并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照。以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构，并进行自体移植。 结果：海藻糖浓度小于800mmol／L，皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增（P〈0．05），浓度大于800mmol／L，海藻糖载入量差异不显著。孵育温度为37℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4℃组（P〈0.05），相转变组与37℃组差异无统计学意义。皮肤孵育4，7，9h的海藻糖载入量明显高于孵育0．5h的载入量（P〈0.05），孵育时间为4，7，9h之间的海藻糖载入量差异不显著，但孵育7h后皮肤的海藻糖载入量不再增加。实验以海藻糖浓度为800mmol／L，孵育温度为37℃，孵育时间为7h为优化的负载条件处理大鼠皮肤。冻干皮肤玻璃化状态良好，呈半透明状。水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小平和色洋，组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别。冷冻干燥皮肤的活性明显高于甲醛固定的大鼠皮肤（P〈0．05）。冻干保存的皮肤水化后移植回自体大鼠，町仔活长达13d。 结论：海藻糖可作为干燥保护剂进行大鼠皮肤冷冻干燥保存，海藻糖浓度为800mmol／L，孵育温度为37℃，孵育时间为7h是海藻糖载入大鼠皮肤的最佳条件。