高密度细胞培养对兔关节软骨细胞糖胺多糖合成的作用

背景：软骨细胞体外培养时常发生火分化，合成糖胺多糖的能力下降，延缓软骨细胞的失分化速度是组织工稃学需要解决的重要课题。目的：观察不同接种密度下，软骨细胞合成糖胺多糖的能力。设计、时间及地点：对比观察细胞学实验，于2007-01／05在山两医科大学第：医院骨科实验窄完成。材料：1月龄新两羔兔5只。方法：采用04％Pronase酶和0．025％Ⅱ型胶原酶消化分离舣膝关节关节软骨细胞，来源于同一只兔的软骨细胞分为两部分，一部分以2×10^4／cm^2接种，传代时仍以相同密度接种。另一部分在细胞贴壁后．人工降低细胞密度至2×10^3／cm^2培养。倒置显微镜下观察细胞形态和增殖情况。原代和传1代细胞于细胞融合后换液。主要观察指标：换液后12，24，36，48，60h以改良AIcianblue染色沉淀法测定糖胺多糖质量浓度。结果：原代高密度培养组关节软骨细胞为多边形，轮廓清晰，三四天即可见集落形成，集落周边细胞较中心瘦长，为长多边形，传1代细胞形态无明显变化。低密度培养细胞早期散任分布，7d左右形成集落，细胞形态与高密度培养无明显差片。原代低密度培养软骨细胞长到融合所需时间较原代高密度培养细胞所需时间长。原代低密度培养组上清液中糖胺多糖质量浓度显著低于原代及传1代高密度培养组软骨细胞（P〈0．001，P〈0．05），且时间越长，质量浓度相差越大。结论：与低密度培养相比，平面高密度培养可提高软骨细胞合成糖胺多糖的能力，明显减缓软骨细胞的失分化速度，提示高密度培养更有利于软骨细胞维持表型，是软骨平面培养的较好方式。