RNAi对细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中表达的沉默作用

R349.54; 背景:利用RNAi技术引发细胞因子信号转导抑制因子1沉默可促进神经内分泌肿瘤细胞的凋亡,然而对于内皮细胞是否有类似的作用,目前尚不清楚.目的:实验拟验证内皮细胞中是否有细胞因子信号转导抑制因子1表达,并在所设计的siRNA中,筛选出1对对细胞因子信号转导抑制因子1沉默效率最高的siRNA.设计、时间及地点:随机对照,体外细胞学实验,于2007-12/2008-06在南昌大学医学院第二附属医院所属的江西省分子医学重点实验室完成.材料:人脐静脉内皮细胞由南京凯基生物公司提供.方法:设计并化学合成4对靶向细胞因子信号转导抑制因子1的siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4.培养人脐静脉内皮细胞,利用RT-PCR检测人脐静脉内皮细胞是否有细胞信号转导抑制因子1表达.将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25,50,75,100 nmol/L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光倒置显微镜下观察转染效率,对比得出有最佳转染效率的浓度.然后,实验根据不同的处理因素分成8组:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组4个对照组.将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48 h后提取RNA.主要观察指标:利用RT-PCR测定细胞因子信号转导抑制因子1 mRNA的相对表达水平.结果:人脐静脉内皮细胞高表达细胞因子信号转导抑制因子1.siRNA在50 nmol/L时有较高的转染效率.4对siRNA干扰后,细胞因子信号转导抑制因子1 mRNA的表达水平与阴性对照、转染试剂组和空白对照组相比明显下调(P＜0.05),与阳性对照组相比显著下调(P＜0.01),其中siRNA-3的沉默效率最高(P＜0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组与阳性对照组相比明显下调(P＜0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组之间差异无显著性意义(P＞0.05).结论:内皮细胞中存在细胞因子信号转导抑制因子1表达.RNAi抑制细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中的表达,实验筛选出1对沉默效率最高的siRNA.